怎么提取植物细胞dna,如何提取植物dna
博凌科为新型快速
植物
基因组
DNA提取试剂盒
改进的CTAB植物DNA抽提液(添加多种针对植物
特点
的
多糖
、多酚去除成份)迅速裂解细胞和灭活细胞内
核酸酶
,氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和
蛋白质
,
上清
加入异丙醇离心
沉淀
基因组DNA,进一步去除其它各种
杂质
,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基
质膜
,再通过一系列快速的漂洗-离心步骤,
进一步将多糖,多酚和细胞
代谢物
,蛋白等杂质去除,
最后低盐的洗脱
缓冲液
将基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒特点:
◆
离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制
吸附膜
,柱与柱之间
吸附量
差异极小,
可重复性
好。克服了国产
试剂盒
膜质量不稳定的弊端。
◆
不需要使用有毒的
苯酚
,氯仿等试剂。
◆
快速,简捷,单个
样品
操作一般可在1小时内完成。
植物叶绿体DNA的提取步骤?注明药品用量和浓度哦~先将植物细胞用纤维素酶和果胶酶处理,得到没有细胞壁的原生质体,然后把原生质体放入蒸馏水中使其胀破,然后进行离心,分离出叶绿体(比较明显,一层绿色的),然后把分离得到的叶绿体打碎(用搅拌机),把打碎后的物质溶于,滤液中含有要提取的DNA,然后,滤取不溶物(DNA)(此时NaCl浓度为0.14mol/L),又把不溶物(DNA)溶于2mol/L的NaCl溶液中,过滤不溶物(杂质),取滤液,向滤液中加蒸馏水,又至有丝状不溶物析出,如此重复几次,最后把丝状物捞出,就得到粗取的叶绿体DNA了.鉴定的话用二苯胺试剂水浴加热,会有蓝色出现.
植物DNA提取的原理和方法是什么?
原理就是去掉植物细胞壁
细胞膜
质体
线粒体
叶绿体
剩下细胞核了。就是DNA了。
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。
十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl
ammomum
bromide,简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium
dodecyl
sulfate,简称SDS)等离子型表面活性剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂,能使蛋白质变性,并使抽提液分相,因核酸(DNA、RNA)水溶性很强,经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀,沉淀DNA溶于TE溶液中,即得植物总DNA溶液
如何从植物组织中提取较纯的dna简单的讲法的话,就是要先将植物细胞的细胞壁用果胶酶和纤维素酶在0.5~0.6mol/L的甘露醇溶液中去除,然后将获得的原生质体破碎后高速离心,获得细胞核内的核酸,然后先用CATB方法去除蛋白质,也就是在保证核酸不被破坏的情况下用苯酚除去蛋白质,然后分液,弃掉有机相,然后加1/10体积的3M醋酸钠(pH5.2)和2.5倍体积的无水乙醇,轻轻倒置混匀,待絮状物出现后,离心。弃上清液。 沉淀用75%乙醇洗涤,离心,弃上清液。 室温下挥发乙醇,待沉淀将近透明后加50-100mlTE溶解过夜。